1.1.1.2. Microscopio Invertido
Como su nombre lo dice un microscopio invertido está al revés comparado con un microscopio convencional. La fuente de luz y el condensador están sobre la plataforma apuntando hacia abajo.Los objetivos y la torrecilla están debajo de la plataforma apuntando hacia arriba. Las únicas cosas que están en disposición corriente son el tubo binocular o trinocular, así mismo la muestra es colocada sobre la plataforma o platina mecánica.
Aunque un microscopio electrónico tiene gran significado en la magnificación y resolución de la muestra, éste requiere que el especímen sea completamente preparado, conduciendo a que cualquier tipo de vida en la muestra no sobreviva. Por otra parte, el microscopio de luz concede una observación temporal de muestras vivas, sin embargo, éstas requieren una hidratación constante que las somete a estres permanente, imposibilitando de tal manera su supervivencia. A diferencia de estos microscopios, el microscopio invertido permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparación previa, favoreciendo el monitoreo del estado de crecimiento, comportamiento y demás parámetros involucrados en el desarrollo del cultivo.
Con un microscopio invertido se pueden observar cultivos enteros o grandes muestras bajo estados más naturales y con disminuidas condiciones de estres. La observación se realiza a través de las bases de diferentes recipientes con espesores y características ópticas variables, tales como placas de Terasaki, frascos Corning, frascos Roux, cajas de Petri plásticas y de vidrio. El material plástico es ópticamente superior que el de vidrio debido que son más delgados y uniformes.
Una desventaja del microscopio invertido es su limitada magnificación, debido a que los objetivos más potentes son de 40X y de 60X, aunque éste último eventualmente se encuentra en el mercado y es de muy alto costo. Si embargo estos objetivos tienen la ventaja de sobrepasar el límite del grosor del recipiente y observar la imagen con fineza.
http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artjul98/invert.htmlComponentes.
En el microscopio invertido se identifican los siguientes componentes:Portalámpara: Es un casquillo dentro del cual se encuentra la lámpara que es la fuente de luz halógena.
Soporte de filtros: Es un contenedor dentro del cual se insertan filtros específicos para el tipo de iluminación requerida en la observación. El filtro de cobalto es de color azul, pasa la luz de amarillo a blanco, viéndose la imagen en campo claro (es un tipo de iluminación que permite observar la muestra oscura contra un fondo claro). El filtro verde es indispensable para el contraste de fases (es un tipo de iluminación que diferencia la imagen en grado de tono, brillo o color, observándose las células traslúcidas) y eventualmente puede emplearse para contraste en relieve o de interferencia (que produce alto contraste, imágenes tridimensionales y reales de objetos transparentes, a diferencia del contraste de fases suple una claridad definida, imagen detallada de células gruesas o células con amplios índices de refracción).
Portanillos de luz: Es una corredera de anillos, que se maneja de acuerdo con el tipo de iluminación requerida (contraste de fases o contraste en relieve). No se emplean anillos para campo claro.
Apertura del diafragma: Es un dispositivo con el cual se gradúa el nivel de luz emitido por la lámpara. Puede ser mantenido bajo para enfocar fácilmente sobre muestras no coloreadas o abierto para contraste de fases.
Condensador: Es un sistema de lentes que recoge los rayos de luz y los converge dentro de un foco. Está localizado directamente por encima de la plataforma del microscopio y está acoplado con la apertura del diafragma para controlar el incremento de la resolución, realzar el contraste, reducir el resplandor y garantizar óptimos resultados con todas las combinaciones ocular–objetivos.
Soporte: Es el que sostiene el condensador y la lámpara manteniendo la estabilidad del microscopio.
Plataforma mecánica: Platina metálica donde se colocan las muestras a observar, presenta un orificio central que comunica la luz proveniente del condensador con los objetivos.
Carro mecánico: Soporte hueco en el cual se acopla el recipiente del cultivo, posee una regleta que permite el movimiento del carro sobre la plataforma mecánica, de derecha a izquierda o de arriba hacia abajo. De acuerdo con el tipo de recipiente se emplea un soporte específico. En el caso de los frascos no se emplea este soporte. Sin embargo éste es un accesorio que puede ser reemplazado, colocando cualquier recipiente directamente sobre la plataforma mecánica y haciendo el monitoreo del cultivo manualmente, con movimientos diagonales o en zig zag.
Objetivos: Es un sistema de lentes complejos localizados debajo de la plataforma mecánica. Los objetivos corrientes de alto poder, tienen muy corta distancia de trabajo y por lo tanto deben acercarse a la muestra para su enfoque, en el microscopio invertido los objetivos son adaptados para trabajar a largas distancias debido a que el grosor de los recipientes impide el contacto estrecho entre el objetivo y la muestra. Además los objetivos son corregidos para enfocar muestras sobre diferentes bases.
El aumento de los lentes se identifica con un código de colores; 4X - rojo, 10X – amarillo, 20X – verde, 32 o 40X – azul. El objetivo de 100X no es disponible para este microscopio. Comercialmente los microscopios invertidos tienen dos presentaciones de objetivos; la primera con aumentos de 4X, 10X, 20X y 32X y la segunda con aumentos de 4X, 10X, 20X y 40X.
Revolver de portaobjetivos: Es un dispositivo donde se ensamblan los objetivos.
Otras piezas: Son los botones micro y macrométrico, tubo binocular o trinocular (en caso de poseer un fototubo para adaptar cámara fotográfica), oculares, anillo de ajuste de dioptrías (para la corrección de la diferencia de dioptrías entre ambos ojos), botón para ajustar el bulbo de voltaje (regula la entrada de voltaje al microscopio prolongando su tiempo de duración), receptáculo para el cable de conexión comunicado con el fusible del microscopio.Algunas ventajas y desventajas del microscopio invertido.
Una gran ventaja del microscopio de luz sobre el microscopio electrónico es la habilidad para observar organismos vivos y tejidos. Varios tipos de microscopios electrónicos requieren que el espécimen altamente preparado (lo cual incluye recubrimientos con oro) y vacío para la observación. En los microscopios de luz se pueden observar temporalmente organismos vivos, lo cual permite determinar algunas funciones vitales, sin embargo las muestras se preparan con soluciones de alcohol o formaldehido, componentes que denaturan las proteínas y los ácidos nucleicos(5). Mientras un microscopio electrónico tiene una alta magnificación y resolución que un microscopio de luz (algunos producen espectaculares imágenes tridimensionales), sólo produce imágenes de muestras muertas(4).
A diferencia de estos microscopios, en el invertido los cultivos o muestras se pueden colocar en diferentes recipientes con espesores y características ópticas variables, se utilizan entonces, placas de Terasaki, frascos Corning, frascos Roux, cajas de Petri plásticas y de vidrio, lo cual permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparación previa, se pueden además observar grandes cultivos o muestras bajo estados muy naturales, lo cual permite disminuir las condiciones de estrés(4).
La primer desventaja es el costo. Los microscopios invertidos no están en cualquier lugar, como si lo está un microscopio con una configuración estándar por eso es poco competitivo para los fabricantes (4). Otra desventaja es su limitada magnificación, pues el objetivo más potente es de 60X, siendo poco frecuente en el mercado y de muy alto costo. Actualmente se están comenzando a fabricar objetivos de 100X que se utilizan en aceite de inmersión, sin embargo son bastante costosos y escasos.
Bibliografía.
1. Cooper, G. 1996. The Cell. Amolecular Approach. Oxford University. N:J: USA. pp. 20-23.
2. De Robertis. 1991. Biología Celular y Molecular. Editorial El Ateneo. Buenos Aires, Argentina. pg. 63-64.
3. Di Fiori, M. 1956. Diagnóstico Histológico. Tomo I. Editorial El Ateneo. Buenos Aires, Argentina. pg. 6-12.
4. Goldstein, D. Inverted Microscopes. Washington, USA. http://micscape.simplenet.com/mag/artjul98/invert.html
5. Lodish, H., Berk, A., Matsudatra, P., Baltimore, D., Zipursky, L., and Darnell, J. 1995. Molecular Cell biology. Scientific Books, Inc. N.J, USA. pp. 148-150.
6. Organización Panamericana de la Salud y Organización Mundial de la Salud. 1983. Manual de Técnicas Básicas para un Laboratorio de Salud. Editorial OMS. Ciudad de México, México. pg. 13-21.
Para mayor información se puede buscar en las siguientes páginas:http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artsep98/invert2.html
http://www.leica-ead.com/
http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artjul98/invert.html