RESÚMENES DE TESIS DE
POSGRADO
DETECCIÓN DE LAS
TRANSLOCACIONES MAS COMUNES EN 117 CASOS DE LEUCEMIA
AGUDA MEDIANTE RT-PCR
Autor: GARCIA ESCORCIA LILIANA
Director: GUEVARA GONZALO
Las técnicas moleculares son consideradas de gran sensibilidad y
especificidad en la detección de translocaciones . La presencia de
estas alteraciones han sido asociadas a diferentes
factores de riesgo. Se conoce que la presencia de alteraciones como t(12;21),
t(15;17), t(8;21) e Inv.(16) son consideradas de buen
pronóstico, la t(1;19) pronóstico
intermedio y las translocaciones t(9;22) y t(4;11) de
pésimo pronóstico. Alguna de estas alteraciones son difícilmente detectables
mediante las técnicas convencionales de citogenética (bandas G y bandas Q) y
cuya detección depende de la obtención de metafases analizables. Se analizaron
117 casos con leucemia aguda ( 92 casos con leucemia
linfoide aguda y 25 casos con leucemia mieloide
aguda), en pacientes pediátricos y adultos desde Agosto de 1998 a Diciembre de
1999. Por técnicas moleculares en LLA se detectó la presencia de t(12;21)
en seis casos , t(4;11) en cuatro casos,
t(1;19) en cuatro casos y t(9;22) en
tres casos, en LMA se observaron t(15;17) en seis casos, t(8;21) en seis casos
e Inv.(16) un caso. Mediante técnicas moleculares se
detectaron un total de 26% de alteraciones, mientras que por citogenética en
esta población se detectó un total de 7%
de estas alteraciones, lo cual confirma su gran sensibilidad.
Autor: Lidia Natalia Peñalosa
Director: Luis Alberto Gómez
Las células tumorales se caracterizan por alteraciones
en el control de la proliferación, diferenciación y muerte celular. Recientes
estudios plantean la posibilidad de usar agentes farmacológicos que induzcan
control del crecimiento celular como el radiosensibilizador
y análogo de la timina, la Bromodeoxiuridina (BrdU). Sin embargo,
los efectos biológicos de la BrdU y la radiación
ultravioleta (UV) sobre la viabilidad, proliferación y sensibilización a la
radiación en células de melanoma metastásico, B16, ha
sido poco estudiada. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la
BrdU sobre el crecimiento y la sensibilización a la
radiación ultravioleta tipo C (UVC) de células de melanoma B16. El efecto
supresor del crecimiento de la BrdU y UVC, con y sin BrdU (2.5 g/ml), se determinó por los ensayos de
viabilidad y proliferación, exclusión del Azul Tripán
y el MTT (Bromuro de [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil
tetrazolium]) y la integridad del ADN se analizó por
el perfil electroforético. La supresión del crecimiento
fue dosis y tiempo dependiente (IC50 5.4 g/ml, TI50 73.5 horas) y fue
asociada con incremento en la adhesividad a la matriz extracelular, digestión
parcial del ADN y muerte celular, reminiscente de apotosis. Este estudio confirma la supresión del crecimiento
celular (74.5%) y la sensibilización a la radiación UVC inducida por la BrdU sobre células de melanoma murino
B16 in vitro
y establece un modelo experimental para investigar mecanismos moleculares
involucrados en la radiosensibilización y supresión
del crecimiento tumoral inducidos por potenciales agentes terapéuticos adyuvantes
de la radio y quimio-terapia convencionales como la BrdU.
Palabras clave: Melanoma murino, Bromodeoxiuridina, Radiación Ultravioleta, Radiosensibilización.
Autor: Cesar .Mauricio Baracaldo
Director: Camilo . Rozo
El propósito de este estudio fue evaluar el cambio en
la concentración de retinol y ß-caroteno (BC) en
hígado y suero de ratas, después de la suplementación
con BC sintético y vegetales comúnmente consumidos ricos en carotenoides
(zanahoria y espinaca). 64 ratas Wistar machos recién
destetadas fueron asignadas al azar en 4 grupos de 16 ratas cada uno. Las ratas
recibieron como dieta diaria alimento comercial durante las 4 semanas de
experimentación. Además, se les administró diariamente preparados
de las tres fuentes de BC mediante un sistema de alimentación forzada. Los 4
grupos de ratas fueron suplementados de acuerdo al siguiente esquema: 1. Grupo
control (GC), 0.2 mL de aceite de maíz; 2. Grupo BC
puro (GBC), 60 µg RE en 0.2 mL
de aceite de maíz; 3. Grupo Zanahoria (GZ), 60 µg RE
en 0.2 mL de aceite de maíz; 4. Grupo Espinaca (GE),
60 µg RE en 0.2 mL de
aceite de maíz. Las ratas fueron pesadas diariamente. Al final de cada semana 4
ratas de cada grupo fueron anestesiadas para colectar muestras de sangre por
punción cardíaca y se les disectó
el hígado. Los análisis del contenido de retinol y BC
en suero e hígado fueron realizados por HPLC.
El análisis de varianza no mostró diferencias
significativas (a=0.05) en el incremento del
peso de los animales ni en el incremento de retinol y
BC en suero e hígado en los 4 grupos durante las 4 semanas de suplementación. El análisis de correlación entre los
niveles de retinol y BC en suero y en hígado no
mostró correlación entre estos dos parámetros. El análisis de regresión de los
niveles de BC hepático en los 4 tratamientos mostró las siguientes pendientes:
GBC: 0.909; GZ: 0.451; GE: 0.444 y GC: 0.203. Estos resultados indican que se
presentó la mayor absorción en el grupo GBC, mientras que la absorción de BC en
los grupos GZ y GC fue de aproximadamente la mitad.
Palabras clave: ß-caroteno, retinol,
vitamina A, biodisponibilidad y ratas
Inhibición
del crecimiento de células de melanoma
humano y murino inducido por la Genisteina
y la L-Tirosina in
vitro
Autor: Lina Maria. Escobar
Director: Luis Alberto Gómez
EFECTO DE DIFERENTES POBLACIONES DE CELULAS MONONUCLEARES
SOBRE EL CRECIMIENTO DE Cryptococcus neoformans E INDUCCION DE LA PRODUCCIÓN DE IFN
POR SU POLISACARIDO CAPSULAR
Autor:GRANADOS V.
Director: GONZALEZ, J. M.1, A.
Las poblaciones linfoides como parte
fundamental de sistema inmune innato y adaptativo,
han sido implicadas en las respuestas inmunes frente a microorganismos
encapsulados como Cryptococcus neoformans. Las células NK, como parte de esta población,
se caracterizan por presentar una gran variedad de receptores en su membrana,
incluyendo receptores para polisacáridos. En este trabajo se pretendió
determinar el efecto de subpoblaciones mononucleares humanas, haciendo énfasis en las subpoblaciones de células NK, CD3-/CD56+/NKRP1+ y NKT,
frente a la replicación de C. neoformans; al igual que la producción de IFN
en respuesta (GXM), principal componente del polisacárido capsular de la
levadura. Mononucleares totales, mononucleares
sin monocitos y mononucleares
con aumento en el porcentaje de NK, a diferentes concentraciones (20x104,
10x104, 5x 104 y 3 x104), se incubaron durante
24 y 48 horas con la levadura, tiempo en el cuál se hizo el recuento de
unidades formadoras de colonias (UFC); de igual manera la población mononuclear sin monocitos y con
aumento en NK se incubó previamente con el polisacárido GXM, y posteriormente
se agregó la levadura, se volvió a incubar durante los mismos tiempos, y finalmente
se hizo el recuento de UFC. De los anteriores cultivos se recogieron sobrenadantes, los cuales fueron puestos en contacto con el
microorganismo durante 24h y 48h y de la misma manera se hizo el recuento de
UFC. Para hacer el análisis de las poblaciones productoras de IFN en
respuesta al polisacárido capsular, mononucleares sin
monocitos se activaron con PHA/PMA y con GXM durante
18 horas, tiempo en el cual se incubaron con anticuerpos monoclonales marcados
con fluorocromos y finalmente se colocó anti-IFNLas diferentes poblaciones
se analizaron por citometría de flujo. Los ensayos
con células mononucleares totales mostraron 80% de
inhibición tanto a las 24 como a las 48 horas. Con la población sin monocitos, se obtuvieron porcentajes de inhibición del 18%
a las 48 horas y con las poblaciones con aumento en NK el porcentaje de
inhibición fue en promedio del 45%. Al observar el efecto de células
preactivadas con GXM sobre la replicación de la levadura, obtuvimos que el
porcentaje de inhibición a las 48 horas fue del 100% y
que dicha inhibición fue dependiente de la concentración de polisacárido. Los
resultados con sobrenadantes de 48 horas de células
con aumento en NK mostraron que dicha inhibición fue del 53.3%, por otra parte
los datos de las poblaciones analizadas por citometría
de flujo, mostraron porcentajes mayores de INF en respuesta a GXM, en
la población CD3-/CD56+/CD161+, igualmente pudimos ver que existen poblaciones
CD4+ y CD8+ que también responden produciendo IFN frente a dicho
antígeno. Con los resultados obtenidos en este estudio, utilizando el sistema
de cultivo para evaluar el efecto de las diferentes poblaciones mononucleares sobre el crecimiento de C. neoformans, se sugiere una actividad
inhibitoria que depende del aporte de diferentes subpoblaciones
celulares como LT, NK y monocitos probablemente por
la producción de mediadores solubles que podrían ejercer dicho efecto; siendo
los monocitos una de las más importantes en la
respuesta contra la levadura. Aunque el trabajo se dirigió al estudio de las
células NK, nuestros bajos niveles de pureza no nos permiten hacer un mejor
análisis del papel de esta población. Con respecto a los ensayos de citometría de flujo, se pudo establecer de manera
interesante que la inducción de INF frente a GXM, se lleva a cabo en
poblaciones celulares con características fenotípicas distintas; aunque se
encontró un porcentaje alto de producción en células CD3-/CD56+/CD161+ (NK).
Igualmente se encontraron poblaciones CD3-/CD161- productoras de la citocina en respuesta al polisacárido lo que sugiere la
posibilidad de la existencia de otros receptores diferentes al NKR-P1(CD161) aún no determinados.
ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE LAS CEPAS DE Clostridium tetani: HARVARD,
MASSACHUSETTS Y CARACAS PARA LA PRODUCCIÓN DE TOXINA TETÁNICA EN UN FERMENTADOR
DE 5L
Autor: Gutiérrez
Ivon
RESUMEN
En el presente trabajo se compararon las cepas de Clostridium tetani: Harvard
y Caracas contra la cepa Massachusetts, la cual se ha
utilizado rutinariamente en la producción de la vacuna antitetánica en el
Instituto Nacional de Salud desde 1970. Adicionalmente se evaluó la influencia
de la adición de glutamato en el medio de cultivo
sobre el crecimiento y la producción de toxina de las tres cepas estudiadas.
Los resultados obtenidos indican que no existe diferencia estadísticamente
representativa en el comportamiento cinético de las cepas Massachusetts
y Harvard, mientras que la cepa Caracas muestra un
comportamiento diferente; esta última requiere el doble de tiempo para alcanzar
el valor de biomasa máxima y el título máximo, el cual es un 63.4% menor que el
obtenido con las otras cepas estudiadas, lo que la descarta como una buena
candidata para la producción de toxina tetánica. Adicionalmente, se concluyó
que la adición de glutamato al medio no tiene
influencia sobre el crecimiento del microorganismo, ni sobre su capacidad
productora, pero si disminuye en un 39.5% el tiempo en el cual se alcanza la
toxina máxima y por consiguiente se obtiene una mayor productividad, entendida
como Lf de toxina/L.h,
siendo esto válido para las tres cepas estudiadas.
Palabras clave:
fermentación, vacuna, toxina tetánica, glutamato.
ESTUDIO DE CÉLULAS INDIVIDUALES T Y B
HUMANAS ESPECÍFICAS DE ROTAVIRUS POR CITOMETRÍA DE FLUJO.
Autor: María Cristina Jaimes
Director: Genoveva
Keyeux
RESUMEN
Si bien los rotavirus son patógenos humanos
importantes, la respuesta inmune protectora contra ellos no está bien
establecida. Pocos estudios han investigado la respuesta celular T humana CD4+
y ninguna la CD8+ contra el rotavirus. Aquí se
estudio al respuesta celular T
específica contra rotavirus en linfocitos de sangre
periférica utilizando un ensayo de citometría de
flujo basado en la detección de CD69 y de citoquinas
intracelulares como marcadores de células T que han sido recientemente
activadas por el antígeno viral in vitro. Linfocitos específcos
de rotavirus CD8+ que secretan interferón gamma
fueron detectados en adultos voluntarios sin y con infección documentada
reciente por rotavirus. En cambio, células T CD4+
interferón (IFN) gamma +, pero no interleuqina 13
+, fueron detectadas predominantemente
en adultos recientemente infectados. En niños entre 3 meses y 7 años de edad
con infección por rotavirus reciente, no fue posible
detectar células T específicas de rotavirus con la
metodología utilizada. En los niños además, las respuestas CD4+, y en menor
grado la CD8+, al estimular las células
con el superantígeno SEB (utilizado como control
positivo) fueron menores que las respuestas correspondientes en los adultos.
Por otra parte teniendo en cuenta que el rotavirus
se replica exclusivamente en la mucosa intestinal, se sugiere que las células B
específicas de rotavirus expresan el receptor de migración intestinal 47.
Para verificar esta hipótesis utilizamos un ensayo de citometría
de flujo que identifica las células B (CD19+) de memoria (IgD-)
que expresan en su superficie una inmunoglobulina específica de rotavirus. Como antígeno viral para este ensayo se utilizaron
partículas seudovirales 2/6 fluorescentes. Con este ensayo se detectaron células
específicas de rotavirus
tanto en adultos como en niños recientemente infectados. Al marcar con un
anticuerpo anti 47 se evidenció que
las células que expresan una inmunoglobulina específica de rotavirus
en su superficie son 47+.